E. D. Mytsa, L.Yu. Kokaeva, S.N. Elansky
Oomycete Fitoftora infestans (Mont) de Bary povzroča pozno ožig, nevarno bolezen krompirja in paradižnika. Eden glavnih virov primarnega inokuluma P. infestans so debelostenske počivajoče reproduktivne strukture – oospore.
Hibridne oospore, ki nastanejo kot posledica križanja genetsko različnih starševskih sevov, prispevajo k povečanju genotipske raznolikosti v populaciji, zaradi česar se pospeši proces prilagajanja sevov novim sortam in uporabljenim fungicidom.
Tvorba oospore P. infestans na tem področju so opazili v mnogih državah sveta: Rusiji (Smirnov et al., 1999), Norveški (Hermansen et al., 2002), Švedski (Strömberg et al., 2001), Nizozemski (Kessel et al., 2002) in druge regije. Oospore lahko preživijo več kot 2 leti v tleh v sposobnem stanju (Bødker et al., 2006) in povzročijo okužbo rastlin po prezimovanju (Ulanova et al., 2010; Lehtinen et al., 2002).
Prej je bilo dokazano, da imajo listi rastlin različnih stopenj krompirjevega grma razlike v odpornosti na pozno ožig; poveča se od spodnjih listov do zgornjih. Ta nagnjenost ni odvisna od starosti listov, starosti rastlin in sorte krompirja (Vesper in sod., 2003). Hkrati nam v literaturi ni uspelo najti podatkov o razlikah v intenzivnosti nastajanja oospore v listih različnih plasti krompirjevega grma. Če pa takšne razlike obstajajo, jih je treba upoštevati pri jemanju vzorcev listov za analizo tvorbe oospore in pri interpretaciji rezultatov drugih avtorjev. Namen tega dela je bil preučiti nastanek oospore v odcepljenih listih različnih plasti rastline krompirja, nameščenih v enakih razmerah v vlažnih komorah.
Materiali in metode
Uporabili smo 5 izolatov P. infestans različne vrste parjenja, izolirane iz prizadetih vzorcev, pripeljanih iz regij Moskve, Rjazana in Leningrada. Od tega so bili izbrani 3 pari sevov različnih vrst parjenja, ki so pri testiranju v agar ovsenem mediju dali obilne oospore.
Za testiranje smo uporabili brezvirusne rastline krompirja naslednjih sort, gojenih v rastlinjaku (v šotnem substratu): zgodnji Sandrin, Zorachka, Uladar, Osiris, srednje zgodnji Ilyinsky, sredi sezone Yanka.
Za analizo smo izbrali preproste liste iz različnih nivojev rastline krompirja. Iz spodnjega nivoja so bili izbrani trije listi (4 spodnji sestavljeni listi), trije z vrha (3-4 sestavljeni listi na vrhu) in trije listi iz središča grma. Enostavne liste smo stehtali, fotografirali na koordinatnem papirju (za izračun prostornine in površine) in jih nato postavili z glavo navzdol na površino sterilne vode, ki smo jo vlili v 25 ml petrijevke. Nato smo vsak list okužili z eno kapljico mešane suspenzije izolatov zoosporangije A1 in A2 paritvenega tipa. Za tri liste, vzete iz vsake ravni, smo uporabili inokulum treh različnih parov izolatov. En list je bil okužen z mešanico inokuluma enega para izolatov.
Za pripravo suspenzije zoosporangije smo 7 dni gojili izolate različnih vrst parjenja na agar ovsenem mediju, nato pa smo zoosporangije izprali s sterilno destilirano vodo. Koncentracija inokuluma je bila 5-7 zoospor v vidnem polju mikroskopa pri povečavi 80x. Vsak list smo okužili z eno kapljico mešane suspenzije izolatov zoosporangije A1 in A2 paritvenega tipa.
V vseh poskusih smo uporabili 3 liste krompirja na varianto. Po 20-dnevni inkubaciji pri 18 °C smo vsak list homogenizirali v možnarju z 2 ml destilirane vode. Iz nastale suspenzije smo vzeli 3 vzorce, iz katerih smo pripravili pripravke za mikroskopijo.
V vsaki varianti smo pregledali 180 vidnih polj, nato pa smo preračunali število oospor na 1 mm.2 površino lista. Rezultati štetja za vsako varianto so bili povprečni.
Za izračun intervala zaupanja (μ) za stopnjo pomembnosti 0,05 je bila uporabljena naslednja formula
kjer je s standardni odklon, n število meritev, t je konstanta t-testa za stopnjo pomembnosti 0,05. Vsi izračuni so bili izvedeni v Excelu (paket Microsoft Office).
Rezultati in razprava
Inokulacija listov, zbranih iz različnih plasti krompirjevega grma in postavljenih v enake razmere v vlažne komore, je pokazala razlike v intenzivnosti tvorbe oospore. Pri vseh preučevanih sortah je bilo največje število oospore nastalo med inokulacijo listov, zbranih iz spodnjega in srednjega sloja grma. Pri tvorbi oospore v spodnjih in srednjih listih niso bile ugotovljene pomembne razlike.
Najmanjše število oospore je nastalo v listih zgornje plasti (slika 1).
V listih spodnjega in srednjega sloja je bilo največje število oospore oblikovano pri sortah Sandrin, Ilyinsky, Zorachka, Uladar in Osiris. Nekoliko manj intenzivno so se oblikovale v listih sorte Yanka. Največje število oospore v listih zgornje plasti je bilo opaženo pri listih sorte Uladar, nato so Zorachka, Osiris, Yanka, Ilyinsky, Sandrin šli v padajočem vrstnem redu, vendar niso bile vse razlike statistično pomembne.
riž. 1. Nastajanje oospore v listih različnih plasti krompirjevega grma. Spodnji so listi treh spodnjih nivojev grma, zgornji so 3-4 zapleteni listi z vrha rastline, srednji so iz sredine grma.
Vrstice napak prikazujejo interval zaupanja za raven pomembnosti 0,05.
Na terenu mikroklimatske razmere prispevajo tudi k nastanku oospore v spodnjih in srednjih listih grma: večja vlažnost, zmanjšana sončna insolacija in dnevna temperaturna nihanja (Harrison, 1992). Zgornje škropljenje povzroči manj pesticidov na dnu in v sredini grma. Za zmanjšanje nastajanja oospore je treba uporabiti tehnologije, ki omogočajo uspešno dostavo fungicidov v spodnje in srednje dele grma. Dobre rezultate lahko dosežemo z uporabo turbulentnih zračnih škropilnic in sistemskih fungicidov, ki se lahko razširijo na neobdelane dele grma.
To delo je podprla Ruska znanstvena fundacija (projekt št. 14-50-00029).
Članek je bil objavljen v reviji "Zaščita krompirja" (št. 2, 2015)